一、接種

將微生物接到適于它成長繁衍的人工培育基上或活的生物體內的進程叫做接種。

１、接種東西和辦法

　　在試驗室或工廠實踐中，用得**多的接種東西是接種環、接種針。由于接種請求或辦法的不一樣，接種針的針尖部常做成不一樣的形狀，有刀形、耙形等之分。有時滴管、吸管也可作為接種東西進行液體接種。在固體培育基外表要將菌液均勻涂布時，需求用到涂布棒。（圖３－３）　

圖３－３　接種和別離東西

1．接種針 2.接種環 3.接種鉤 4.5.玻璃涂棒 6.接種圈 7.接種鋤 8.小解剖刀

　　　

　　常用的接種辦法有以下幾種：

　　１）劃線接種 這是**常用的接種辦法。即在固體培育基外表作來回直線形的移動，就可到達接種的效果。常用的接種東西有接種環，接種針等。在斜面接種和平板劃線中就常用此法。

　　２）三點接種 在研討霉菌形狀經常用此法。此法即把少數的微生物接種在平板外表上，成等邊三角形的三點，讓它各自獨立構成菌落后，來調查、研討它們的形狀。除三點外，也有一點或多點進行接種的。

　　３）穿刺接種 在保藏厭氧菌種或研討微生物的動力經常選用此法。做穿刺接種時，用的接種東西是接種針。用的培育基通常是半固體培育基。它的做法是：用接種針蘸取少數的菌種，沿半固體培育基中心向管底作直線穿刺，如某細菌具有鞭毛而能運動，則在穿刺線周圍能夠成長。

　　４）澆混接種 該法是將待接的微生物先放入培育皿中，然后再倒入冷卻**45°C擺布的固體培育基，敏捷輕輕搖勻，這么菌液就到達稀釋的意圖。待平板凝結以后，置適宜溫度下培育，就可長出單個的微生物菌落。

　　５）涂布接種 與澆混接種略有不一樣，即是先倒好平板，讓其凝結，然后再將菌液倒入平板上面，敏捷用涂布棒在外表作來回擺布的涂布，讓菌液均勻分布，就可長出單個的微生物的菌落。

　　６）液體接種 從固體培育基中將菌洗下，倒入液體培育基中，或許從液體培育物中，用移液管將菌液接**液體培育基中，或從液體培育物中將菌液移**固體培育基中，都可稱為液體接種。

　　７）打針接種 該法是用打針的辦法將待接的微生物轉接**活的生物體內，如人或其它動物中，多見的疫苗防止接種，即是用打針接種，接入人體，來防止某些疾病。

　　８）活體接種 活體接種是專門用于培育病毒或其它病原微生物的一種辦法，由于病毒有必要接種于活的生物體內才干成長繁衍。所用的活體可所以全部動物；也可所以某個離體活安排，例如猴腎等；也可所以發育的雞胚。接種的辦法是打針，也可所以拌料喂食。

２、無菌操作

　　培育基經高壓滅菌后，用經過滅菌的東西（如接種針和吸管等）在無菌條件下接種含菌資料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培育基上，這個進程叫做無菌接種操作。在試驗室查驗中的各種接種有必要是無菌操作。

　　試驗臺面不管是什么資料，一概請求潤滑、水平。潤滑是便于用消毒劑擦拭；水平是倒瓊脂培育基時利于培育皿內平板的厚度保持一致。在試驗臺上方，空氣活動應緩慢，雜菌應盡量削減，其周圍雜菌也應越少越好。為此，有必要打掃室內，封閉試驗室的門窗，并用消毒劑進行空氣消毒處理，盡可能地削減雜菌的數量。

　　空氣中的雜菌在氣流小的狀況下，跟著灰塵落下，所以接種時，翻開培育皿的時刻應盡量短。用于接種的用具有必要經干熱或火焰等滅菌。接種環的火焰滅菌辦法：通常接種環在火焰上充沛燒紅（接種柄，一邊滾動一邊慢慢地來回經過火焰三次），冷卻，先觸摸一下培育基，待接種環冷卻到室溫后，方可用它來挑取含菌資料或菌體，敏捷地接種到新的培育基上。（圖３－４）然后，將接種環從柄部**環端逐步經過火焰滅菌，恢復。不要直接燒環，避免殘留在接種環上的菌體爆濺而污染空間。平板接種時，通常把平板的面歪斜，把培育皿的蓋翻開一小部分進行接種。在向培育皿內倒培育基或接種時，試管口或瓶壁外面不要觸摸底皿邊，試管或瓶口應歪斜一下在火焰上經過。

二、別離純化

　　富含一種以上的微生物培育物稱為混和培育物（Mixed culture）。假如在一個菌落中所有細胞均來自于一個親代細胞，那么這個菌落稱為純培育（Pure culture）。在進行菌種鑒守時，所用的微生物通常均請求為純的培育物。得到純培育的進程稱為別離純化，辦法有許多種。

１、傾瀉平板法

　　shou要把微生物懸液經過一系列稀釋，取必定量的稀釋液與熔化好的保持在40~50°擺布的養分瓊脂培育基充沛混合，然后把這混合液傾瀉到無菌的培育皿中，待凝結以后，把這平板倒置在恒箱中培育。單一細胞經過屢次增殖后構成一個菌落，取單個菌落制成懸液，重復上述過程數次，便可得到純培育物。（圖３－５，a）

1.菌懸液 2.熔化的培育基 3.培育物 4.無菌水

２、涂布平板法#p#分頁標題#e#

　　shou要把微生物懸液經過適當的稀釋，取必定量的稀釋液放在無菌的現已凝結的養分瓊脂平板上，然后用無菌的玻璃刮刀把稀釋液均勻地涂布在培育基外表上，經恒溫培育便能夠得到單個菌落。（圖３－５，b）

３、平板劃線法

　　**簡略的別離微生物的辦法是平板劃線法。用無菌的接種環取培育物少量在平板上進行劃線。劃線的辦法許多，多見的對比簡單呈現單個菌落的劃線辦法有斜線法、曲線法、方格法、放射法、四格法等。（圖３－６）當接種環在培育基外表上往后移動時，接種環上的菌液逐步稀釋，**終在所劃的線上分散著單個細胞，經培育，每一個細胞長成一個菌落。（圖３－７）

４、富集培育法

　　富集培育法的辦法和原理十分簡略。咱們能夠**一些條件只讓所需的微生物成長，在這些條件下，所需求的微生物能有效地與別的微生物進行競賽，在成長才能方面遠遠超越別的微生物。所**的條件包括挑選**適的碳源、能源、溫度、光、pH、滲透壓和氫受體等。在相同的培育基和培育條件下，經過屢次重復移種，**終富集的菌株很簡單在固體培育基上長出單菌落。假如要別離一些專性寄生菌，就有必要把樣品接種到相應靈敏宿主細胞集體中，使其許多成長。經過屢次重復移種便能夠得到純的寄生菌。

　　　　

５、厭氧法

　　在試驗室中，為了別離某些厭氧菌，能夠使用裝有原培育基的試管作為培育容器，把這支試管放在沸水0浴中加熱數分鐘，以便逐出培育基中的溶解氧。然后迅速冷卻，并進行接種。接種后，參與無菌的白臘于培育基外表，使培育基與空氣阻隔。另一種辦法是，在接種后，使用N2或CO2取代培育基中的氣體，然后在火焰上把試管口密封。有時為了更有效地別離某些厭氧菌，能夠把所別離的樣品接種于培育基上，然后再把培育皿放在徹底密封的厭氧培育裝置中。

三、培育

　　微生物的成長，除了受自身的遺傳特性決議外，還遭到許多外界要素的影響，如養分物濃度、溫度、水分、氧氣、ＰＨ等。微生物的品種不一樣，培育的辦法和條件也不盡相同。

１、影響微生物成長的要素

　　微生物的成長，除了受自身的遺傳特性決議外，還遭到外界許多要素的影響。影響微生物成長的要素許多，簡要介紹如下。

1) 養分物濃度

細菌的成長率與養分物的濃度有關:μ=μmax*C/(K+C)

 

　　養分物濃度與成長率的聯系曲線是典型的雙曲線。

　　K值是細菌成長的很根本的特性常數。它的數值很小，標明細菌所需求的養分濃度十分之低，所以在自然界中，它們處處成長。可是養分太低時，細菌成長就會遇到困難，甚**還會逝世。這是由于除了成長需求能量以外，細菌還需求能量來保持它的生計。這種能量稱為保持能。另一方面，跟著養分物濃度的增加，成長率愈接近**大值。

２）溫度

　　在必定的溫度范圍內，每種微生物都有自已的成長溫度三基點：**低成長溫度、**適成長溫度和**高成長溫度。在成長溫度三基點內，微生物都能成長，但成長速率不一樣。微生物只要處于**適成長溫度時，成長速度才**快，代時**短。超越**低成長溫度，微生物不會成長，溫度太低，甚**會逝世。超越**高成長溫度，微生物也要中止成長，溫度過高。也會逝世。通常狀況下，每種微生物的成長溫度三基點是穩定的。但也常受其它環境條件的影響而發生變化。

　　依據微生物**適成長溫度的不一樣，可將它們分為三個類型：

　　a.嗜冷微生物：其是適成長溫度多數在-10℃－20℃之間

　　b.中溫微生物：其**適成長溫度通常在20℃－45℃之間

　　c.嗜熱微生物：成長溫度在45℃以上。

３）水分

　　水分是微生物進行成長的必要條件。芽孢、孢子萌生，shou要需求水分。微生物是不能脫離水而生計的。可是微生物只能在水溶液中成長，而不能生活在純水中。各種微生物在不能成長發育的水分活性范圍內，均具有狹小的適當的水分活性區域。

４）氧氣

　　依照微生物對氧氣的需求狀況，可將它們分為以下五個類型。

　　a.需氧微生物

　　這類微生物需求氧氣供呼吸之用。沒有氧氣，便不能成長，可是高濃度的氧氣對需氧微生物也是有毒的。許多需氧微生物不能在氧氣濃度大于大氣中氧氣濃度的條件下成長。jue大多數微生物都屬于這個類型。

　　b.兼性需氧微生物

　　這類微生物在有氧氣存在或無氧氣存在狀況下，都能成長，只不過所進行的代謝路徑不一樣算了。在無氧氣存在的條件下，它進行發酵效果，例如酵母菌的無氧乙醇發酵。

　　c.微量需氧微生物

　　這類菌是需求氧氣的，但只在0.2大氣壓下成長**佳。這可能是由一它們富含在強氧化條件下失活的酶，因此只要在低壓下效果。

　　d.耐氧微生物

　　這類微生物在成長進程中，不需求氧氣，但也不怕氧氣存在，不會被氧氣所殺死。

　　c.厭氧微生物

　　這類微生物在成長進程中，不需求分子氧。分子氧存在對它們成長發生毒害，不是被抑制，即是被殺死。#p#分頁標題#e#

２、培育辦法

1）依據培育時是否需求氧氣，可分為好氧培育和厭氧培育兩大類。

　　好氧培育：也稱“好氣培育”。即是說這種微生物在培育時，需求有氧氣參與，不然就不能成長良好。在試驗室中，斜面培育是經過棉花塞從外界取得無菌的空氣。三角燒瓶液體培育多數是經過搖床振動，使外界的空氣源源不斷地進入瓶中。

　　厭氧培育：也稱“厭氣培育”。這類微生物在培育時，不需求氧氣參與。在厭氧微生物的培育進程中，**主要的一點即是要除掉培育基中的氧氣。通常可選用下列幾種辦法：

　　a.下降培育基中的氧化復原電位：常將復原劑如谷胱甘肽、硫基醋酸鹽等，參與到培育基中，便可到達意圖。有的將一些動物的死的或活的安排如牛心、羊腦參與到培育基中，也可適宜厭氧菌的成長。

　　b.化合去氧：這也有許多辦法，主要有：用焦性沒食子酸吸收氧氣；用磷吸收氧氣；用好氧菌與厭氧混合培育吸收氧氣；用植物安排如發芽的種子吸收氧氣；用發生氫氣與氧化合的辦法除氧。

　　c.阻隔阻氧：深層液體培育；用白臘油封存；半固體穿刺培育。

　　d.代替驅氧 用二氧氣碳驅代氧氣；用氮氣驅代氧氣；用真空驅代氧氣；用氫氣驅代氧氣；用混和氣體驅代氧氣。

２）依據培育基的物理狀況，可分為固體培育和液體培育兩大類。

　　固質培育：是將菌種接**疏松而賦有養分的固體培育基中，在適宜的條件下進行微生物培育的辦法。

 

　　液體培育：在試驗中，經過液體培育能夠使微生物敏捷繁衍，取得許多的培育物，在必定條件下，仍是微生物挑選增菌的有效辦法。